冷雨萱

临床微生物学检验（理论）期末复习01-UJS医学检验毕业生

细菌部分（上篇）

参考教材：人民卫生出版社《临床微生物学检验（第5版）》
球菌
主要是化脓性细菌——能感染人体并引起化脓性炎症的细菌
第一节葡萄球菌属
分布非常广泛。病原性葡萄球菌是最常见的化脓性细菌，医务人员的带菌率70%vs正常30%。主要包括三个菌种：金黄色葡萄球菌（s.aureus)、表皮葡萄球菌(s.epidermidis)及腐生葡萄球菌(s.saprophyticus)。
一、金黄色葡萄球菌
（一）生物学特性
1、形态染色：单个菌体呈球形，呈葡萄串状排列，直径平均1μm，G+菌，无鞭毛，无芽孢；
2、培养特性：营养要求不高，普通培养基即可生长，中等大小S型菌落，并因种不同出现金黄色、白色、柠檬色脂溶性色素，金萄菌溶血毒素在血平板上形成β溶血闪光灵程。
3、生化反应：触酶（+），致病菌株分解甘露糖。
4、抗原结构
葡萄球菌A 蛋白 (SPA) 、多糖抗原（磷壁酸中的成分）、荚膜抗原
葡萄球菌A蛋白(SPA)：存在于90%以上的金黄色葡萄球菌细胞壁表面的一种蛋白质，能与人及多种哺乳动物的IgG分子的Fc段非特异性结合。功能：具有抗吞噬作用可进行协同凝集反应，以及免疫荧光、放射免疫和酶联免疫技术中用来替代第二抗体，促进细胞分裂，与噬菌体吸附呈负相关大西洋战役 ，激活补体途径。
荚膜：有利于黏附和抗吞噬。
多糖抗原（磷壁酸抗原）：黏附。
5、分类
①依生化反应不同分为： 金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生性葡萄球菌
②依色素不同分为： 金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌
③依是否产生凝固酶分为： +/ -
④依噬菌体裂解作用不同分为：4~5群26型
6、抵抗力：是无芽胞菌中抵抗力最强的：干燥脓汁、痰液中存活２~３月；耐热（60℃ 1h 或80℃ 30min 才可杀灭）；耐盐（10%~15% NaCl)；对碱性染料敏感（2%~4%龙胆紫）；对磺胺和青霉素耐药（90%金葡）
（二）致病性与免疫性
致病物质
1、凝固酶：是指于体外能使含有抗凝剂（枸橼酸钠或肝素）的人或兔血浆发生凝固的酶类。是鉴别葡萄球菌有无致病性的指标。（但也有例外）
结合凝固酶：结合于菌体表面，其作用是在菌体表面形成纤维蛋白原受体，当细菌混悬于人或兔血浆中时，纤维蛋白原与其受体两者交联而使细菌凝聚。
凝固酶耐热，100℃，30min，或高压灭菌仍保持部分活性。易被蛋白酶分解破坏。
功能：阻碍吞噬细胞对细菌的吞噬及杀灭作用；纤维蛋白还可沉积在病灶周围，阻止药物及机体内杀菌物质与细菌接触，利于其繁殖。纤维蛋白的大量形成能限制细菌扩散，并易使局部毛细血管栓塞，导致组织坏死，故葡萄球菌引起的化脓感染多为局限性。
决定了金黄色葡萄球菌引起化脓性感染时的感染特点：病灶局限、不易扩散、而且脓汁粘稠。
2、葡萄球菌溶血素：
性质：属外毒素，血平板菌落周围产生β溶血环
分型：分α、β、γ、δ、ε五型，对人致病的主要有α溶血素，对白细胞、血小板和多种组织细胞有破坏作用，并能引起局部小血管收缩，导致局部组织缺血和坏死。
抗原性：强，经甲醛处理可制成类毒素，用与葡萄球菌 感染的防治和治疗。
溶血机制：α溶血素对红细胞的作用机制是毒素分子插入细胞膜疏水区，破坏膜完整性，造成细胞溶解，血红蛋白外逸。虽非葡萄球菌感染中唯一的毒力因子，但是当感染灶形成后是造成组织病变的重要致病物质。
3、杀白细胞素（PV）：选择性地作用于中性粒细胞和巨噬细胞，使细胞破坏并在抵抗宿主细胞的吞噬作用、增强本菌侵袭力方面有一定意义。
4、肠毒素：部分金葡菌产生，可引起急性胃肠炎。属外毒素，有多种血清型，但以A、D型引起的食物中毒多见。是热稳定的单纯蛋白，100℃ 30 min仍有活性，且不受胰蛋白酶的影响，食入后引起急性胃肠炎。作用机制不明，有超抗原特性，作用部位在中枢神经。
5、表皮剥脱毒素：又称表皮溶解毒素，为蛋白质，有抗原性，可被脱毒称为类毒素。
类别：A型噬菌体编码耐热，B型质粒编码不耐热。作用：引起葡萄球菌烫伤样皮肤综合征（SSSS）
6、毒性休克综合征-1（TSST-1）：
引起毒性休克综合征。诱发休克的机制：抑制内毒素的脱毒或直接损伤肝枯否氏细胞，使内毒素在体内蓄积；刺激枯否氏细胞等单核吞噬细胞系统，释放血管活性物质，干扰心血管系统及血液动力学；增加毛细血管通透性，继而引起心血管功能损伤而导致休克-毒性休克综合征（TSS）
7、其它
①耐热核酸酶：致病性葡萄球菌产生，其特点是耐热大秦直道，经100 ℃ 15分钟或60 ℃ 2小时不被破坏；能较强的降解DNA或RNA。临床上已将耐热核酸酶作为测定葡萄球菌有无致病性的重要指标。
②透明质酸酶：又称为扩散因子，溶解细胞间质中的透明质酸，利于细菌的扩散。90%以上的金黄色葡萄球菌产生此酶。
③脂酶：作用为分解血浆和机体各部位表面的脂肪和油类，细菌藉以获得必需营养从而可定居于分泌脂质的部位，故脂酶的产生对细菌入侵皮肤和皮下组织是很重要的。
所致疾病
1、化脓性感染：
局部性感染: 伤口感染、疖、痈、毛囊炎
全身性感染：败血症、脓毒血症
内脏器官感染：呼吸道感染、脓胸、心内膜炎
假膜性肠炎：菌群失调后引起的局部炎症
尿路感染
2、毒素性疾病：食物中毒、烫伤样皮肤综合征、中毒性休克综合征
免疫性：人体对葡萄球菌感染具有天然免疫力，病后机体可产生抗体，但维持时间短，可再次感染
（三）微生物学检查
取材：脓汁、血液、可疑食物、呕吐物、粪便等
直接镜检：革兰染色
分离培养和鉴定：形态学鉴定、抗原性测定、药敏试验
血平板上有透明溶血环，多为金黄色菌落；血浆凝固酶试验；耐热核酸酶试验；厌氧甘露醇发酵
肠毒素检验：动物实验、ELISA
致病性葡萄球菌的鉴定依据：产生血浆凝固酶、耐热核酸酶、金黄色色素、溶血素、发酵甘露醇。
（四）防治
预防很重要，医务人员的带菌率高达70%，是院内交叉感染的重要传染源；注意个人卫生；加强食品卫生管理；防止医院内感染；严防乱用抗生素；药敏试验指导下用药。
二、凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）
过去认为不致病，但目前已成为医源性感染的常见菌，而且耐药菌株为金葡更为多见。特性：正常微生物丛；菌群失调症、医源性感染
CNS十余种与致病有关，最多是表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌。常引起泌尿系统感染、细菌性心内膜炎、败血症及术后感染。
第二节链球菌属
营养要求高（血液、 血清、葡萄糖）；在血清肉汤中易形成长链，管底呈絮状沉淀；在血琼脂平板上, 形成灰白色，表面光滑，边缘整齐，直径0.5~0.7mm的细小菌落；不同菌株溶血性不一
一、链球菌属分类
（一）根据血平板上溶血现象分类
1、甲型溶血性链球菌：菌落外1~2mm宽草绿色不完全溶血环（α溶血），为条件致病菌（肺炎链球菌也是本种溶血）。
2、乙型溶血性链球菌：菌落外2~3mm宽透明的完全溶血环（β溶血），致病力最强。
3、丙型链球菌：不溶血，不致病。
（二）根据抗原结构的分类
细胞壁多糖抗原—C抗原分群：A、B、C等20群，对人致病的90%属A群。同一群又分若干型，如：A群根据M型抗原分成约100型。
（三）根据氧的需要分类
需氧链球菌及兼性厌氧链球菌：致病
厌氧链球菌：条件致病菌
传统分类：A、C、G群β溶血型链球菌 / B群β溶血型链球菌：无乳链球菌 /α溶血溶血性链球菌：肺炎链球菌和草绿色链球菌 /不溶血D群链球菌
二、抗原构造
蛋白质抗原：又称表面抗原，为细胞壁中的蛋白质成分，位于多糖抗原的外侧，可分为M、R、T、S四种，与致病有关的是M蛋白，它为特异性蛋白，可用于分型。
多糖抗原：又称C抗原，可用于分群或分族，除甲型链球菌外，所有链球菌细胞壁中均有此抗原，依C抗原的差异，可将链 球菌分为A、B、C等20个族，对人致病的溶血性链球菌90%属A族
核蛋白抗原：P抗原, 无特异性，与葡萄球菌交叉
三、抵抗力：不强，60℃ 30分钟可被杀死，对一般消毒剂及抗菌药敏感，其中只有粪链球菌的抵抗力较强。
四、致病性与免疫性
（一）致病物质
A群链球菌（即乙型溶血性链球菌）也称化脓性链球菌，或溶血性链球菌，是人类链球菌中致病力最强的细菌，有较强侵袭力。
1、菌体成分
脂磷壁酸 (LTA)：粘附于多种细胞表面
F蛋白：粘附于上皮细胞表面，
与纤维蛋白原结合，增强抗吞噬能力
M蛋白：具有抗吞噬细胞的吞噬和杀菌作用尹先炳，帮助链球菌黏附于上皮细胞进行繁殖。其产生的抗体对机体有一定的保护力。可引起超敏反应性疾病。
2、侵袭性酶类
透明质酸：可分解细胞间质的透明质酸，使细菌易于组织间扩散
链激酶：能使血液中的溶纤维蛋白酶原转化成溶纤维蛋白酶，故可溶解血块或阻止血浆凝固，有利于细菌扩散
链道酶：又称链球菌DNA酶，能分解脓汁中粘稠的DNA，使脓汁稀薄，促进细菌扩散
胶原酶
3、毒素
链球菌溶血素：
①链球菌溶血素O（SLO）：A族产生，含-SH的蛋白质毒素，对氧敏感，（ -SH易被氧化成-S-S-，失去溶血作用）；抗原性强，刺激机体产生的抗体持续时间较长。
②链球菌溶血素S（SLS）：是小分子的糖肽，含-S-S-，对氧不敏感（血平板上菌落周围的溶血环由其溶血形成）；无抗原性。
致热外毒素：由A族产生，不耐热，抗原性强，又称红斑毒素或猩红热毒素，有致 热、致死作用，是引起猩红热症状的主要毒素。
（二）所致疾病
A群链球菌（多为乙型链球菌）
1、化脓性疾病：丹毒、脓皮病、淋巴组织炎、蜂窝组织炎、痈等；病灶有扩散倾向，界限不清，脓汁稀薄，带血色, 也可引起其它部位的感染。
2、中毒性疾病：猩红热
3、超敏反应性疾病：急性肾小球肾炎、风湿热
其它链球菌感染：甲型链球菌 — 细菌性心内膜炎；变异链球菌 — 龋齿；B族链球菌 — 新生儿败血症、脑膜炎，免疫力低下成人继发感染；D族链球菌 — 泌尿系统感染
（三）免疫性：可刺激机体产生多种抗体，抗M蛋白、致热外毒素抗体；人体被感染后，可获得一定的免疫力，但链球菌型别多，可反复感染。
五、肺炎球菌
属链球菌属，学名为肺炎链球菌，寄生于上呼吸道，多数不致病，是大叶性肺炎的病原体
（一）生物学性状
G+ ，有毒株在机体内形成较厚的荚膜，人工培养后消失，具有荚膜多糖抗原，营养要求高，血平板上的菌落与甲链的相似
生化反应：菊糖发酵／胆汁溶菌／Optochin敏感试验
抵抗力：弱，56℃ 20mins，对一般消毒剂均敏感，有荚膜的菌株抗干燥能力强，无阳光直射的干痰中可存活1至2年
（二）临床特征
致病物质：脂磷壁酸、荚膜，另外，本菌产生的溶血素、神经氨酸酶也有一定的致病作用。
所致疾病：当机体抵抗力减弱时，寄生在上呼吸道的肺炎球菌可引起大叶性肺炎，肺炎后可继发胸膜炎、脓胸，也可引起中耳炎、脑膜炎和败血病等。
同型免疫力牢固，因菌型多，故可因再感染其它型菌而患病
（三）防治原则
预防：多价荚膜多糖菌苗，免疫效果较好
治疗： 大剂量青霉素或林可霉素治疗；肺炎球菌对磺胺易产生耐药性。
六、微生物学检验
脓汁：直接涂片— 局部化脓性疾病 /分离培养 — 全身感染
血清：抗链O试验 — 超敏反应性疾病 /血清总补体和C3含量测定
痰标本（肺炎链球菌）：直接涂片 /血平板→菊糖发酵＋、胆汁溶菌＋、Optochin敏感试验＋，动物致病性试验
（一）病原学检验
取材：脓汁、穿刺液、咽拭子、血液、等
直接镜检：革兰染色／抗原检测
分离培养和鉴定：
β溶血：触酶试验（与金葡相区别）、杆菌肽敏感试验（A群）、CAMP试验（B群）、其它
α溶血：菊糖发酵／胆汁溶菌／ Optochin敏感试验（肺炎链球菌）、VP／脲酶精氨酸等（草绿色链球菌）
γ溶血：胆汁七叶苷试验（牛链球菌）
药敏试验
（二）血清学检验
抗“O”试验（ASO test）：链球菌侵入体内产生SLO，刺激机体产生相应抗体ASO，当两者中和后，在加入SLO 乳胶试剂，因病人血清中ASO量很多，未被中和掉的抗体与乳胶试剂反应，产生清晰凝集，为阳性；无凝集，为阴性。
原理：中和试验 /方法：间接凝集 /结果：效价大于400单位
意义：风湿热及其活动性的辅助诊断
七、防治原则
预防：减少传染源
治疗：积极治疗，首选青霉素
第三节肠球菌属
原属D群链球菌，为G+球菌，成双或短链状排列，最适生长温度35℃，不溶血或α溶血。如今耐药菌株增多。
一、菌种与分型
组1：鸟肠球菌、假鸟肠球菌、棉子糖肠球菌、恶臭肠球菌
组2：粪肠球菌、屎肠球菌、卡氏黄色肠球菌、孟氏肠球菌、微黄肠球菌、鸡肠球菌
组3：坚韧肠球菌、海瑞肠球菌、不称肠球菌、粪肠球菌(变异株)
组4：硫黄色肠球菌
致病物质：黏附素，细胞溶素等。
二、病原学检查
取材：尿液、脓汁、穿刺液等
直接镜检：Gram stain
分离培养和鉴定： γ溶血（不溶血） /6.5%Nacl生长试验(+) /胆汁七叶苷试验(+) /PYR(吡咯烷酮β-萘基酰胺)水解试验(+)
药敏试验
肠球菌属是医院感染的重要病原菌，引起尿路感染、腹腔盆腔感染、败血症等。
三、临床意义
为消化道、胆道、阴道和下尿道的正常菌群，是医院感染的主要病原菌。
对大多数常用的抗菌药物如头孢菌素、青霉素、氨基糖甙类抗生素呈固有耐药皮五传奇，所致重症感染较为难治。常见的感染有尿路感染，腹腔、盆腔的创伤和外科手术后的感染等。
治疗：因其耐药严重，应根据药敏结果选择抗生素。
第四节奈瑟菌属（Neisseria）
一、脑膜炎奈瑟菌
（一）生物学性状
G- 双球菌， 肾形或豆形，似一堆咖啡豆，无鞭毛、芽胞，有菌毛，少数可见荚膜，常存在于中性粒细胞内
营养要求极高，需要X、V因子，因而常用巧克力色培养基培养；专性需氧，初次分离时须供给5%~10%的CO2 才能良好生长；培养后形成较大的无色透明露滴状的菌落
抵抗力弱，对干燥、冷热及紫外线敏感，对常用消毒剂及抗菌素均敏感，可产生自溶酶
（二）临床特征及其免疫
是流行性脑脊髓膜炎（流脑）的病原菌，正常人带菌率为5%~10%，发病率为50%，但由于血脑屏障的存在，出现症状的为少数。
致病物质：菌毛、荚膜、内毒素
经飞沫传播，引起流脑。
临床类型：普通型、爆发型、败血症型。儿童发病率比成人要高，因血脑屏障发育不成熟。
免疫力不持久
（三）病原学检查
取材：脑脊液、血液等
直接镜检：革兰染色／抗原检测／PCR
分离培养和鉴定（巧克力色平板）：形态学鉴定、触酶试验（＋）、氧化酶试验（＋）、氧化分解糖类（＋）、其它
药敏试验
（四）防治原则
儿童要接种流脑荚膜多糖疫苗
发现患者及时隔离、治疗，对患者用青霉素治疗或磺胺（能达到脑脊液，疗效更好）
二、淋病奈瑟菌——淋球菌
（一）生物学特性
形态与脑膜炎球菌很相似，有菌毛，无芽胞，无鞭毛，新分离的菌株有荚膜。
培养时营养要求高，也需要巧克力色血平板，抵抗力弱，初次分离也需要5%~10% CO2。
菌毛蛋白抗原、脂寡糖抗原、外膜蛋白抗原
抵抗力极弱
（二）临床特征
致病物质：菌毛、IgA1蛋白酶、外膜蛋白、内毒素等。所致疾病：成人淋病、新生儿脓漏眼
淋病是世界上发病率最高的性传染病，人对淋球菌无自然抵抗力，普遍易感，是唯一宿主。淋球菌主要经性接触传播，男性引起尿道炎，女性则引起阴道炎、外阴炎、宫颈糜烂、子宫内膜炎、输卵管炎及盆腔腹膜炎。
免疫力不持久
（三）病原学检查
取材：浓汁、分泌物等
直接镜检：革兰染色／抗原检测／PCR
分离培养和鉴定（巧克力色平板）：
形态学鉴定、触酶试验（＋）、氧化酶试验（＋）、葡萄糖发酵（＋）、其它
药敏试验
（四）防治原则
预防为主，洁身自爱，加强卫生宣传。患者要彻底治疗，首选青霉素，但耐药菌株日益增多
患淋病的孕妇，分娩后对新生儿要立即用1%硝酸银滴眼，防止新生儿淋病性结膜炎（即脓漏眼）的发生

肠杆菌科
是一大群寄居于人和动物肠道中的革兰氏阴性无芽胞杆菌，常随人与动物粪便排出，广泛分布于水、土壤或腐物中。
包括致病性较强、能引起人类传染病的菌属：鼠疫耶尔森菌、伤寒沙门菌
引起人类腹泻和肠道感染的菌属（四个）：埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、耶尔森菌属

肠杆菌科的共同特点：
1、形态与结构：革兰氏阴性杆菌，多数有鞭毛，大多有菌毛，少数有荚膜或包膜，无芽胞。
2、培养特性：需氧或兼性厌氧菌，在普通培养基上生长良好，常用肠道选择培养基分离培养。
3、生化反应：生化反应活泼，乳糖发酵试验在初步鉴别肠道致病和非致病菌时有重要意义，生化反应与致病性成反比。
4、Ag构造：菌体（O）Ag、鞭毛（H）Ag、表面（K、Vi）Ag、粘附因子（F）Ag
菌体抗原（O）Ag：为细胞壁的LPS最外侧的重复寡糖单位，决定O抗原的特异性。
鞭毛抗原（H）Ag：蛋白质成分，不耐热，特异性强；可发生H-O变异。
荚膜（K／Vi）抗原：如大肠杆菌的K抗原；多糖抗原Vi是K抗原的特殊形式，如伤寒杆菌，能阻抑O凝集
肠道杆菌共同抗原：抗原决定簇位于LPS的核心多糖上，在细菌鉴定和分类中有一定的意义
菌毛（F）抗原：是细菌表面的黏附结构，能阻断O凝集
5、变异现象：S-R、H-O、Ag、耐药性、毒素产生、生化反应等
6、传播方式：污染的饮水及食物、经消化道传播。
7、致病性：菌毛、表面Ag、内毒素、肠毒素等，以肠道症状为主
8、抵抗力：不强，加热60℃经30分钟即死亡。
第一节大肠杆菌（埃希菌属）
大肠杆菌（E. coli）为埃希氏菌属(Escherichia)代表菌。一般多不致病，为人和动物肠道中的常居菌，在一定条件下可引起肠道外感染。某些血清型菌株的致病性强，引起腹泻，统称病致病大肠杆菌。
非致病性大肠杆菌
生理学意义：刺激机体免疫系统；为机体提供营养成分；构成机体肠道的生物屏障；
可作为水源是否被污染的依据：
我国饮水；细菌总数≤100 个/ml，大肠菌群数 ≤3个/L;
饮料：细菌总数≤100 个/ml，大肠菌群数 ≤5个/100ml。
一、生物学性状
1、形态与染色：革兰氏阴性杆菌，大小(0.4～0.7)×(1～3)μm, 大多数菌 株有动力，有普通菌毛与性菌毛，有些菌株有多糖类包膜，无芽胞 。
2、培养特性：在血琼脂平板上，有些菌株β溶血。在SS或CB选择性培养基上形成有颜色、直径2～3mm的光滑型菌落。
3、生化反应：大部分菌株发酵乳糖产酸产气，IMViC试验为“++--” ，即为大肠菌群。
4、抗原
构造较复杂，有O、K、H、F四种抗原。表示大肠杆菌血清型的方式是按O：K：H排列，例如O111:K58:H2。
O 抗原为脂多糖， H鞭毛抗原
K抗原为荚膜脂多糖抗原。从病人新分离的大肠杆菌多有K抗原，有抗吞噬和补体杀菌作用。
F抗原至少有5种，与大肠杆菌的粘附作用有关。
5、抵抗力：该菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强，
55℃经60分钟或60℃加热15分钟仍有部分细菌存活。在自然界的水中可存活数周至数月，在温度较低的粪便中存活更久。胆盐、煌绿等对大肠杆菌有抑制作用。对磺胺类、链霉素、氯霉素等敏感，但易耐药，是由带有R因子的质粒转移而获得的。
二、致病性
（一）致病物质
1．定居因子（CF）：也称粘附素，即大肠杆菌的菌毛。致病大肠杆菌须先粘附于宿主肠壁，以免被肠蠕动和肠分泌液清除。定居因子具有较强的免疫原性，能刺激机体产生特异性抗体。
2、肠毒素：外毒素只有肠产毒性大肠杆菌产生：
（1）不耐热肠毒素（LT）：对热不稳定，65℃经30分钟即失活。为蛋白质，有免疫原性。由A、B两个亚单位组成。LT的免疫原性与霍乱弧菌肠毒素相似，两者的抗血清交叉中和作用。
B亚单位：与小肠粘膜上皮细胞膜表面的GM1神经节苷脂受体结合
A亚单位为毒性亚单位，A1毒性成分进入细胞与结合 cAMP，细胞主动分泌Na+、K+、碳酸和水，导致严重呕吐和腹泻。
（2）耐热肠毒素（ST）：对热稳定，100℃经20分钟仍不被破坏，免疫原性弱。ST可激活小肠上皮细胞的鸟苷酸环化酶，使胞内cGMP增加，在空肠部分改变液体的运转，使肠腔积液而引起腹泻。
ST与霍乱毒素无共同的抗原关系。
3、其他：胞壁脂多糖的类脂A具有毒性。O特异多糖有抵抗宿主防御屏障的作用红楼炮灰攻略 。大肠杆菌的K抗原有吞噬作用。
（二）所致疾病：
1、肠道外感染：多为内源性感染，泌尿系感染为主，如尿道炎、膀胱炎、肾盂肾炎、上行性尿道感染多见于已婚妇女。也可引起腹膜炎、胆囊炎、阑尾炎等。
婴儿、年老体弱、慢性消耗性疾病、大面积烧伤患者，大肠杆菌可侵入血流，引起败血症堂本海斗。
早产儿，尤其是生后30天内的新生儿，易患大肠杆菌性脑膜炎。
2、肠道感染：ETEC、EPEC、EIEC、EHEC、EAEC

①肠产毒性大肠杆菌（ETEC）
引起婴幼儿和旅游者腹泻，出现轻度腹泻，也可呈严重的霍乱样症状即大量的米泔水样便。腹泻常为自限性，一般2～3天即愈。营养不良者可达数周，也可反复发作。
致病因素是LT或ST，或两者同时致病。有些菌株具有定居因子，常见者为O6：K15：H16、O25：K7：H42。鉴定ETEC主要测定大肠杆菌肠毒素，血清型有一定参考意义。
②肠致病性大肠杆菌（EPEC）:
是婴儿腹泻的主要病原菌，有高度传染性，严重者可致死；成人少见。细菌侵入肠道后，主要在小肠大量繁殖。发热、恶心、呕吐、非血性便。
切片标本中可见细菌粘附于绒毛，导致刷状缘破坏、绒毛萎缩、上皮细胞排列紊乱和功能受损，造成严重腹泻,作用与志贺氏毒素相似，具有神经毒素、细胞毒素和肠毒素性。鉴定EPEC可根据临床表现与血清型。
③肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）：为粪—口途径感染，与菌痢的发病机理相似，临床症状也类于菌痢即里急后重，且无动力故易误诊为细菌性痢疾 。靠内毒素与定居因子致病。
④肠出血性大肠杆菌（EHEC）：即STEC、VTEC。引起散发性或暴发性出血性结肠炎，可产生志贺氏毒素样细胞毒素。EHEC的主要菌型是O157：H7，还可有O26、OⅢ等。
⑤肠集聚性大肠杆菌（EAEC）：引起婴儿持续性腹泻，脱水，偶有血便，不侵袭细胞。毒素为肠集聚耐热毒素（EAST）；另一类毒素似大肠埃希菌的α溶血素。
三、微生物学检查法
（一）细菌的分离与鉴定
1．标本：血液、脓液、脑脊液等，腹泻者取粪便。
2．分离培养与鉴定：粪便标本直接接种肠道杆菌选择性培养基(SS琼脂)。血液需先经肉汤增菌，再转种血琼脂平板。采用一系列生化反应进行鉴定。肠致病性大肠杆菌须先作血清学定型试验。必要时检定肠霉毒素。
（二）卫生细菌学检查
大肠杆菌不断随粪便排出体外，污染周围环境和水源、食品等。取样检查时，样品中大肠杆菌越多，表示样品被粪便污染越严重，也表明样品中存在肠道致病菌的可能性越大。故应对饮水、食品、饮料进行卫生细菌学检查。
1．细菌总数：检测每毫升或每克样品中所含细菌数，采用倾注培养计算。我国规定的卫生标准是每毫升饮水中细菌总数不得超过100个。
2．大肠菌数指数：指每立升中大肠菌群数，采用乳糖发酵法检测。我国的卫生标准是每1000ml 饮水中不得超过3个大肠菌群；瓶装汽水、果汁等每100ml 大肠菌群不得超过5个。
四、防治原则
在肠产毒性大肠杆菌的免疫预防研究中，发现其菌毛抗原在自然感染和人工自动免疫中是一种关键性抗原。
治疗可选用庆大霉素、丁胺卡那霉素等。
第二节志贺菌属（痢疾杆菌）
志贺氏菌属（Shigella）是一类革兰氏阴性杆菌，是人类细菌性痢疾最为常见的病原菌，通称痢疾杆菌。
一、生物学性状
1、形态与染色：大小为（0.5～0.7）×（2～3）μm，无芽胞，无荚膜，无鞭毛。多数有菌毛。革兰氏阴性杆菌。
2、培养特性：为兼性厌氧菌，能在普通培养基上生长，形成中等大小，半透明的光滑型菌落。在肠道杆菌选择性培养基上形成无色菌落。
3、生化反应：分解葡萄糖，产酸不产气。VP试验阴性，不分解尿素，不形成硫化氢，不能利用枸橼酸盐作为碳源。宋内氏志贺氏菌能迟缓发酵乳糖（37℃ 3～4天）。
4、抗原构造与分类：有K和O抗原。
K抗原在血清学分型上无意义，但可阻止O抗原与相应抗血清的凝集反应。
O抗原分为群特异性抗原和型特异性抗原，根据志贺氏菌抗原构造的不同，可分为四群48个血清型（包括亚型）
5、分类
A群：又称痢疾志贺氏菌，通称志贺氏痢疾杆菌。
B群：又称福氏志贺氏菌，通称福氏痢疾杆菌。
C群：又称鲍氏志贺氏菌，通称鲍氏痢疾杆菌。
D群：又称宋内氏志贺氏菌，通称宋内氏痢疾杆菌。
根据志贺氏菌的菌型分布调查，我国一些主要城市在过去二、三十年中均以福氏菌为主。其次为宋内氏菌；志贺氏菌与鲍氏菌则较少见。但近年来，志贺氏菌Ⅰ型的细菌性痢疾已发展为世界性流行趋势。
了解菌群分布与菌型变迁情况，对制备菌苗，预防菌痢具有重大意义。
6、抵抗力：本菌对理化因素的抵抗力较其他肠道杆菌为弱。
不耐热，一般56～60 ℃经10分钟即被杀死。较耐寒，在冰块中存活96天。对化学消毒剂敏感，1%石碳酸15～30分钟死亡。
7、变异：
①S-R型变异：当菌落变异时，常伴有生化反应、抗原构造和致病性（毒到无毒）的改变。
②耐药性变异：由于广泛使抗生素，志贺氏菌的耐药菌株不断增加，给防治工作带来多困难。
③营养缺陷型变异：南斯拉夫Mel（1963年）首创的依赖链霉素的志贺氏菌株（依链株，Sd），作为口服菌苗可预防志贺氏菌痢疾。
二、致病性与免疫性
（一）致病物质
1、侵袭力：志贺氏菌的菌毛能粘附于回肠末端和结肠粘膜的上皮细胞表面，继而在侵袭蛋白作用下穿入上皮细胞内，一般在粘膜固有层繁殖形成感染灶。
2、内毒素：各型痢疾杆菌都具有强烈的内毒素。
内毒素作用于肠壁，使其通透性增高，促进内毒素吸收，引起发热，神志障碍，甚至中毒性休克等。内毒素能破坏粘膜，形成炎症、溃汤，出现典型的脓血粘液便。
内毒素还作用于肠壁植物神经系统，至肠功能紊乱、肠蠕动失调和氢挛石齐平，尤其直肠括约肌痉挛最为明显，出现腹痛、里急后重（频繁便意）等症状。
4、外毒素：志贺氏菌还可产生外毒素，称志贺氏毒素。为蛋白质，不耐热，75～80℃1小时被破坏。该毒素具有三种生物活性：①神经毒性，作用于中枢神经系统，引起四肢麻痹、死亡；②细胞毒性，对人肝细胞、猴肾细胞和HeLa细胞均有毒性；③肠毒性，具有类似大肠杆菌、霍乱弧菌肠毒素的活性，可以解释疾病早期出现的水样腹泻。
（二）所致疾病
细菌性痢疾是最常见的肠道传染病，夏秋两季患者最多。人类对志贺氏菌易感，10～200个细菌可使10～50 %志愿者致病。传染源为病人和带菌者，粪口途径传播，潜伏期１～３天。
1、急性细菌性痢疾：发病急，常在腹痛、腹泻未出现，呈现严重的全身中毒症状。
2、慢性细菌性痢疾：急性菌痢治疗不彻底，或机体抵抗力低、营养不良或伴有其他慢性病时，易转为慢性，病程多在二个月以上。部分患者可成为带菌者，带菌者不能从事饮食业、炊事及保育工作。
3、急性中毒型菌痢：以小儿多见，在消化道症状未出现前，内毒素从肠道吸收入血，引起全身严重的中毒症状，高热、休克、昏迷、呼吸衰竭。死亡率高。
（三）免疫性
病后免疫力不牢固，机体对菌痢的免疫主要依靠肠道的局部免疫，即肠道粘膜细胞吞噬能力的增强和SlgA的作用。SIgA可阻止痢疾杆菌粘附到肠粘膜上皮细胞表面，病后三天左右即出现，但维持时间短，由于痢疾杆菌不侵入血液，故血清型抗体（lgM、lgG）不能发挥作用。
三、微生物学检查与防治
1、标本：粪便
2、分离培养与鉴定
3、快速诊断法：荧光菌球法 /协同凝集试验
四、防治原则
特异性预防主要采用口服减毒活菌苗，近年试用者有Sd株、神氏 2a变异株等。但免疫力弱，维持时间短，故大规模应用还受一定限制。
治疗可用磺胺类药、氨苄青霉素、氯霉素、黄连素等。中药黄连、黄柏、白头翁、马齿苋等均有疗效。
第三节沙门菌属
是肠杆菌科中最复杂的菌属，有2000种以上血清型。根据其对宿主的致病性，可分为三类：①对人致病；②对人和动物均致病；③对动物致病。
对人类有致病性的：
肠热症——伤寒沙门菌，甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌、希氏沙门菌
食物中毒——鼠伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌、肠炎沙门菌
败血症——猪霍乱沙门菌最常见
一、生物学性状
1、形态与染色：大小（0.6～1.0）×（2～3）μm，无芽胞，一般有鞭毛，无荚膜，多数有菌毛，革兰氏阴性杆菌。
2、培养特性：兼性厌氧菌，在普通琼脂平板上形成中等大小、半透明的S型菌落。在肠道杆菌选择性培养基上形成无色菌落。
3、生化反应：
大多产生硫化氢。五管糖试验：不发酵2、5，发酵1、3、4，
除伤寒杆菌产酸不产气外，其他沙门氏菌均产酸产气。
4、抗原构造与分类
主要有O和H两种抗原。少数菌具有表面抗原，功能与大肠杆菌的K抗原相似，一般认为与毒力有关，故称Vi 抗原。
①O抗原：特异性多糖抗原，分组的依据，42组A~Z，刺激机体免疫系统产生IgM抗体，将菌液用乙醇或加热处理来制备O抗原。
②H抗原：蛋白质性质；同一组的沙门氏菌按照H抗原的不同分为不同的种和型;刺激机体免疫系统产生IgG抗体;将菌液用甲醛处理来制备H抗原；
③Vi 抗原：新分离的沙门氏菌有此抗原，不稳定加热或石炭酸或在人工培养基上消失；阻抑O凝集现象；刺激机体产生抗体，为带菌免疫利于带菌者的检出。
5、噬菌体分型：有些沙门氏菌在血清学分型的基础上，可借噬菌体进一步分型。分为96个噬菌体型。我国常见者有12个型。伤寒杆菌的噬菌体分型在追踪传染源及发现新型菌株上有实际意义。
6、抵抗力：不强。对热抵抗力不强，60℃ 1小时或65℃经15～20分钟可被杀死。在水中能存活2～3周，类便中可活1～2个月，可在冰冻土壤中过冬。胆盐、煌绿等对本属细菌的抑制作用较对其他肠道杆菌为小，故可用其制备肠道杆菌选择性培养基，利于分离粪便中的沙门氏菌。
7、变异
①H-O变异：有鞭毛的沙门氏菌失去鞭毛的变异
②S-R变异：失去O抗原变为R型菌落，细菌的毒力也随之消失。是第1相、部分是第2相的不同菌落。
③V-W变异：指有Vi 抗原的菌株（V型）失去Vi 抗原（W型），即细菌与抗O血清凝集而不再与抗Vi 血清凝集，称为V-W变异。
④位相变异：将具有第1相和第2相H抗原的沙门氏杆菌接种于琼脂平板上，所得单个菌落，有些是第1相，有些是第2相。南航研究生院如任意挑选一个菌落（第1相或第2相），在培养基上多次移种后，其后代又出现部分是第1相，有些是第2相。
二、致病性与免疫性
（一）致病物质
1．侵袭力：沙门氏杆菌侵入小肠粘膜上皮细胞，穿过上皮细胞层到达上皮下组织。细菌虽被细胞吞噬，但不被杀灭，并在其中继续生长繁殖。菌毛的粘附作用也是细菌侵袭力的一个因素。
2．内毒素：引起发热、白细胞减少。大剂量时可发生中毒性休克
3．肠毒素：有些沙门氏杆菌，如鼠伤寒杆菌可产生肠毒素，性质类似肠产毒性大肠杆菌的肠毒素。
（二）人类的沙门氏菌病
1、肠热症：是伤寒病和副伤寒病的总称，主要由伤寒杆菌和甲、乙、丙型副伤寒杆菌引起。
细菌在肠系膜淋巴结及其他淋巴组织中繁殖，经胸导管进入血流，引起第一次菌血症。第1周，称前驱期。
细菌随血流至骨髓、肝、脾、肾、胆囊、皮肤等并在其中繁殖，再次进入血流，引起第二次菌血症。第2～3周，部分病例皮肤出现玫瑰疹。
部分菌可再次侵入肠壁淋巴组织，出现超敏反应，第4周进入恢复期，患者逐渐康复。
典型伤寒的病程约3～4周。病愈后部分患者可自粪便或尿液继续排菌3周至3个月，称恢复期带菌者。约有3%的伤寒患者成为慢性带菌者。
副伤寒病与伤寒病症状相似，但一般较轻，病程较短，约1～3周即愈。
2、急性胃肠炎(食物中毒)：是最常见的沙门氏杆菌感染。多由鼠伤寒杆菌、猪霍乱杆菌、肠炎杆菌等引起。系因食入未煮熟的病畜病禽的肉类、蛋类而发病。潜伏期短，病程较短，一般2～4天内可完全恢复。
3、败血症：常由猪霍乱杆菌、丙型副伤寒杆菌、鼠伤寒杆菌、肠炎杆菌等引起。病菌进入肠道后，迅速侵入血流，导致组织器官感染，如脑膜炎、骨髓炎、胆囊炎、肾盂肾炎、心内膜炎等。出现高热、寒战、厌食、贫血等。
（三）免疫性
伤寒或副伤寒病后有牢固的免疫性，很少再感染。主要依靠细胞免疫。
体液免疫方面，局部抗体较重要，尤其是SlgA具有特异性防止伤寒杆菌粘附于肠粘膜表面的能力。有菌免疫。
三、微生物学检查与防治
（一）分离培养与鉴定
标本的采取：1周，静脉血 / 全程可采骨髓液 / 2周起，粪便尿液
肠炎型：粪便呕吐物可疑食物
败血症：血液
（二）血清学试验
肥达反应（Widal test）：用伤寒杆菌O抗原和伤寒杆菌、甲/乙型副伤寒杆菌的H抗原与待检血作定量凝集试验。根据抗体含量多少及其增长情况，辅助临床诊断肠热症。
判定结果时必须考虑下述情况：O≥1:80感染急性期 /H≥1:160 确定感染细菌；
1、正常抗体水平：正常人因隐性感染或预防接种，血清中可含有一定量抗体，其效价随各地区情况而不同。一般说来，O凝集价≥1:80、H凝集价≥1:160时才有诊断价值。
2、动态观察：判断肥达氏反应结果须结合临床症状、病期等。单次凝集效价增高，有时不能定论。如间隔数天重复采用，若效价随病程延长而逐渐上升4倍以上，有诊断意义。
3、O/H抗体在诊断上的意义
①若H、O凝集效价均超过正常值，则感染伤寒、副伤寒的可能性大；
②H与O效价均低，则患肠热症的可能性甚小；
③若H效价高而O不高助念新星，可能系预防接种或非特异性回忆反应；
④如O效价高而H不高，可能是感染早期或其他沙门氏菌感染。
4、其他：少数病例在整个病程中，肥达氏试验始终呈阴性。可能是：①发病早期曾用大量或多种抗生素治疗；②患者免疫功能低下。故本试验阴性时，不宜匆忙地否定诊断。
四、防治
采用皮下多次接种死菌苗，虽有一定的保护作用，但常引起局部和全身反应。
可采用氯霉素、氨苄青霉素、羟氨苄青霉素等，中药白花蛇舌草，穿心莲等有效。
第四节其他菌属
（一）克雷伯菌属：克雷伯菌属属肠杆菌科，其代表是肺炎杆菌，即肺炎克雷伯菌(K. peneumoniae)
灰白色粘液菌落，以接种环挑之，易拉成丝，有助鉴别。本菌存在于人体肠道、呼吸道。可引起支气管炎、肺炎，泌尿系和创伤感染，甚至败血症、脑膜炎、腹膜炎等。
1、形态结构：肺炎克雷伯菌为革兰阴性杆菌，无鞭毛，无芽孢，患者标本直接涂片或在营养丰富培养基上的培养物可见菌体外有明显的荚膜。
2、培养特性：兼性厌氧，营养要求不高，在初次分离培养基可形成较大、凸起灰白色黏液型的菌落。菌落大而厚实、光亮，相邻菌落容易发生融合。在MAC培养基上发酵乳糖产酸，形成较大的黏液型、红色的菌落，红色可扩散至菌落周围的培养基中。用接种针沾取时可挑出长丝状细丝。
3、临床意义：克雷伯菌属的细菌多感染免疫力低下的人群，是医院感染中最重要的条件致病菌。所致疾病：肺炎、脑膜炎、腹膜炎、泌尿系统感染、败血症
肺炎克雷伯菌是临床标本中常见的细菌，可引起典型的原发性肺炎。该菌在正常人口咽部的带菌率为1%～6%，在住院患者中可高达20%，是酒精中毒者、糖尿病和慢性阻塞性肺部疾病患者并发肺部感染的潜在的危险因素赵顺然。
肺炎克雷伯菌肺炎亚种还能引起各种肺外感染，包括肠炎和脑膜炎（婴儿），泌尿道感染（儿童和成人）及菌血症。
近年在一些亚洲地区（特别是台湾和韩国）由肺炎克雷伯菌引起的肝脓肿等严重社区获得性侵袭性感染有上升的趋势。
4、鉴定：
（1）属的鉴定：动力阴性凋零雄鹰，鸟氨酸脱羧酶阴性（解鸟氨酸劳特菌阳性），
（2）种的鉴定：肺炎克雷伯菌吲哚阴性，而产酸克雷伯菌吲哚阳性
（二）变形杆菌（Proteus species）
广泛存在于水、土壤腐败的有机物以及人和动物的肠道中，为条件致病菌，多为继发感染，如慢性中耳炎、创伤感染等，也可引起膀胱炎、婴儿腹泻、食物中毒等。
1、生物学性状：
革兰氏阴性菌，呈多形性，周鞭毛菌，运动活泼。在固体培养基上呈扩散生长，形成迁徒生长现象（见不到单个菌落）。若在培养基中加入0.1%石碳酸或 0.4%硼酸可以抑制其扩散生长，形成单个菌落，即发生H-O 变异。
生化反应：葡萄糖＋，乳糖—，快速分解尿素
2、外斐试验：此属细菌X19、XK、X2菌株的O抗原与某些立克次体的部分抗原有交叉，可替代立克次体抗原与患者血清作凝集反应，此反应称为外斐试验（Weil-Felix test），用于某些立克次体病的辅助诊断。

弧菌属
弧菌属（Vibrio）为一大群菌体短小，弯曲成弧，G-单毛菌，运动极活泼，分布广泛，多存在于水中，对人有致病性主要为霍乱弧菌和副溶血弧菌。
共同特征
为革兰阴性菌，弯曲成弧形或直杆状，具有一端单一鞭毛，运动迅速
兼性厌氧，发酵利用葡萄糖，氧化酶＋（除麦氏弧菌外）
对弧菌抑制剂O/129敏感，钠离子能刺激其生长，除霍乱弧菌和拟态弧菌外其他菌种为嗜盐菌
第一节霍乱弧菌
一、生物学特性
1、形态染色：革兰染色阴性，弧形或逗点状。菌体一端有单鞭毛，悬滴镜检呈穿梭或流星样运动；在病人“米泔水”样便中，可呈头尾相接的“鱼群”样排列。O139群有荚膜。
2、培养特性：营养要求不高，兼性厌氧。最适生长温度37℃，具耐碱性，初次分离选用pH8.5的碱性胨水增菌培养，经35℃4h-6h在液体表面形成菌膜。
在硫代硫酸盐-枸橼酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板(TCBS)上菌落呈黄色；在含亚碲酸钾的平板上（糖双洗琼脂平板、庆大霉素琼脂平板）菌落中心灰褐色（碲离子还原为金属碲）；可在无盐培养基上生长（ NaCl 浓度0-6%） ， E1-Tor生物型在BAP可形成β溶血环。
3、生化反应：氧化酶（+）、葡萄糖发酵（+）、蔗糖发酵（+）、吲哚（+）
4、抗原和分型：霍乱弧菌有不耐热的H抗原和耐热的O抗原。根据O抗原的不同分为O1群霍乱弧菌和非O1群霍乱弧菌，其中O1群、O139群引起霍乱。O1群霍乱弧菌分为古典生物型和E1-Tor 生物型。
O1群霍乱弧菌根据O抗原的A、B、C三种抗原成分组成不同分成三个血清型，小川型：含A、B 抗原 /稻叶型：含A、C抗原 /彦岛型：含A、B、C 抗原。
5、抵抗力：较弱，干燥时易死亡，水环境中可存活两周（水源性传播，水性爆发）；怕酸——正常胃酸4min；不耐热——100℃，1-2min；对消毒剂敏感，可用漂白粉处理病人的排泄物或呕吐物。
二、致病性与免疫性
1、致病物质：鞭毛、菌毛
霍乱弧菌肠毒素（CT）：CT由一个A亚单位和5个相同B亚单位组成多聚体蛋白。
A亚单位包含A1和A2两部分，以二硫键相连。A1为毒素活性单位， 激活腺苷酸环化酶（cAMP酶），使细胞内cAMP大量增加。 A2连接A1和B亚单位。
B亚单位与肠粘膜上皮细胞膜上的神经节苷脂GM1受体结合
致病机理：霍乱弧菌进入肠道粘附于肠粘膜上皮细胞，分泌CT，其B亚单位结合细胞膜上GM1受体形成通道，A1进入细胞内激活cAMP酶，细胞内cAMP大量增加，分泌亢进导致严重呕吐和腹泻
临床表现：前驱期、吐泻期、脱水期、恢复期
2、所致疾病：霍乱，在我国属甲类传染病
传染源：病人和无症状感染者的粪便污染的水源和食物。
传播途径：经口传播
潜伏期：2-3d
临床表现：剧烈吐泻、米泔样，每日数十次，持续2-3天，大量失水，严重吐泻引起水电解质紊乱，脱水酸中毒，肾衰、循环衰竭、休克、死亡；及时补充液体和电解质非常重要，可大大降低死亡率。
免疫力：病人愈后可获得牢固免疫
三、微生物学检查法
1、标本直接检查
直接镜检 ：革兰染色，观察有无“鱼群”样排列的革兰阴性弧菌。
动力和制动试验 ：“米泔水”样便制成悬滴标本，直接观察有无呈穿梭样运动的细菌。在悬液中加入1滴霍乱多价诊断血清，若细菌停止运动并发生凝集，则为制动试验＋。
直接荧光抗体染色和抗O1群抗原的单克隆抗体凝集试验，
霍乱毒素的测定：ELISA法或乳胶凝集测定CT
2、分离培养与鉴定
将标本接种于碱性胨水，35℃ 6~8 h接种至TCBS平板或双洗琼脂平板或庆大霉素琼脂平板，霍乱弧菌在TCBS上形成黄色，双洗琼脂或庆大霉素琼脂平板上呈灰褐色中心的菌落
用O1群和O139群霍乱弧菌的多价和单价抗血清进行凝集，结合菌落特征和菌体形态，作出初步报告。
依据全面生化反应，血清学分群及分型进行最后鉴定。符合霍乱弧菌的菌株需区分古典生物型和E1-Tor 生物型。

3、初筛试验：
霍乱红试验：

粘丝试验：霍乱弧菌浓悬液＋0.5％去氧胆酸钠，1’内由混变清，再变粘稠，弧菌属细菌除副溶血性弧菌部分菌株外，均有此反应；
O/129敏感试验
四、防治原则
加强国境检疫，加强水源及粪便管理
及时检出病人，隔离封锁疫区
疫苗接种
对症治疗，及时补充液体和电解质，预防大量失水引起的低血容量性休克和酸中毒，及时抗菌治疗。
第二节副溶血弧菌
又称嗜盐性弧菌，沿海地区常见，存在于近海海水、海泥、海产品中，1950年首发于日本大阪，主要引起食物中毒。是我国沿海地区及海岛食物中毒和急性腹泻最常见病原菌。临床表现有：恶心、呕吐、腹痛、低热、寒战等。呈水样便，偶尔血性，恢复较快，病程2天~3天，通常为自限性。
一、生物学性状
1、形态和染色：为革兰阴性杆菌，极单鞭毛，无荚膜
2、培养特性：营养要求不高，具有嗜盐性（ NaCl浓度1%~8%） ，在无盐培养基上不能生长，最适pH为7.7~8.0，在碱性胨水中经6h~9h增菌可形成菌膜。
在TCBS平板上形成蓝绿色的菌落。从腹泻病人中分离到的副溶血弧菌95%以上在我妻培养基上可产生β-溶血现象，称为神奈川现象（KP）。在SS平板上形成扁平，无色半透明，蜡滴状的菌落，不易刮下。
3、生化反应：氧化酶（+）、蔗糖发酵（-）、葡萄糖发酵（+）
NaCl生长试验：0%NaCl（-），3%NaCl（+），7%NaCl（+），10%NaCl（-）
二、致病因素
副溶血性弧菌通过菌毛的粘附，
KP＋菌株产生耐热直接溶血素（TDH）：①溶血作用，②细胞致死活性，③肠毒性作用，④心脏毒性
KP—菌株产生TDH相关溶血素（TRH）
三、微生物学检查
生化反应：氧化酶＋，脲酶－。葡萄糖＋、麦芽糖＋、甘露醇＋，蔗糖－、乳糖－。吲哚＋、V-P －。赖氨酸脱羧酶＋、鸟氨酸脱羧酶＋，精氨酸双水解酶－
O/129（150μg）敏感
NaCl生长试验：在不含NaCl和含10% NaCl的蛋白胨水中不生长，在3%和7%NaCl 蛋白胨水中生长
神奈川现象＋
毒素测定：用免疫学方法测定TDH和TRH。用基因探针和PCR方法直接测定毒素基因tdh或trh

非发酵菌
是一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽胞的革兰阴性杆菌。通常所讲的非发酵菌指在KIA中24小时内表面能够生长，在底部不生长的需氧革兰阴性杆菌。
【基本鉴定要求】
1、缺少糖发酵的证据巅峰痞少，通常是在KIA或TSI培养基中无酸产生，斜面和底部均呈红色。
2、氧化酶阳性（不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌、唐菖蒲伯克菌、浅黄华丽单胞菌、栖稻黄素单胞菌阴性），但并非所有氧化酶阳性的革兰阴性杆菌都是非发酵菌。
3、麦康凯平板MAC上生长很差或不生长
4、动力阳性
【重要鉴定试验】
1、葡萄糖利用（O/F试验）：蛋白胨和糖类的比例为1:5而不同于发酵菌的1:2。
2、氧化酶试验：多为阳性
3、动力：半固体培养基 应只穿刺培养基顶部4mm，在培养4-6小时后首次观察结果，24和48小时后两次观察结果。更准确的方法是湿片法和鞭毛染色。
4、色素形成：非发酵菌可形成多种色素，有助于菌种的鉴定。
5、硝酸盐还原/产气：将硝酸盐还原成亚硝酸盐，进而释放氮气。
6、吲哚试验：需用含色氨酸丰富的培养基，产吲哚黄杆菌、脑膜败血黄杆菌、食酸丛毛单胞菌等阳性。
7、硫化氢：腐败希瓦菌是非发酵菌中唯一在KIA和TSI上产硫化氢的菌种。

第一节、rRNAⅠ群 / 假单胞菌属
直或微弯无芽孢革兰阴性杆菌， OXI+，动力+（一个或多个极鞭毛），严格需氧，氧化利用葡萄糖、触酶阳性、 MAC生长，水溶性色素。
本属包括铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、斯氏假单胞菌、门多萨假单胞菌、产碱假单胞菌和类产碱假单胞菌。
【临床意义】假单胞菌属分布广泛，人类不发酵菌感染中，假单胞菌占70％～80％，主要为铜绿假单胞菌。
培养鉴定：革兰阴性、无芽胞、专性需氧。有端鞭毛或丛鞭毛。
生长温度范围广，最适生长温度为35℃。产生各种水溶性色素：绿脓素、脓玉红素、荧光素、脓褐素
一、铜绿假单胞菌
分布广泛，是非发酵菌中最具临床意义的细菌，也是医院内感染最多见的细菌，主要引起条件感染。
感染多发生于烧伤、急性白血病、AIDS、器官移植病人及静脉药瘾者，感染多位于潮湿部位，如气管造口、留置的导管、创面、外耳道、角膜和渗出性皮肤伤口处
囊性纤维化病人呼吸道分离的铜绿假单胞菌具有生物膜（其产生的大量藻酸盐包围了菌体所致），导致本菌感染的治疗困难和高死亡率。
其淡蓝色脓性渗出物及绿脓素的生姜样气味具有特征性。
（一）致病机制
结构成分：粘附素、多糖似荚膜物质
毒素S：内毒素（LPS）/毒素：A阻止真核细胞蛋白质合成，S干扰吞噬杀菌作用 /绿脓素：具有氧化还原活性，催化超氧化物和过氧化氢产生有毒基团
酶类：弹性蛋白酶：降解弹性蛋白，有丝氨酸蛋白酶（Las-A）和锌金属蛋白酶（Las-B）二种 /磷脂酶C：分解脂质和卵磷脂，损伤组织细胞
（二）生物学性状
1、形态与染色：细长革兰阴性杆菌，长短不一，极单鞭毛
2、培养特性：严格需氧，氧化利用葡萄糖、 McC生长，最适生长温度35℃，丁秋星4℃不生长，42℃可生长
在普通琼脂平板上产生特征性的蓝绿色水溶性绿脓素和黄绿色青脓素（荧光假单胞菌和恶臭假单胞菌也可产生）；血平板上形成大而扁平，湿润，边缘不齐，有金属光泽，有生姜气味的灰绿色菌落，并形成透明溶血环；有时可产生水滴样菌落，无色素不溶血（囊性纤维化病人）
3、耐药性
本菌对氨苄西林、安美汀、四环素、优力新、一/二代头孢菌素、头霉素、大环内酯类、磺胺等天然耐药，各种抗生素治疗过程中都可能发生耐药，耐药率及多重耐药株上升较快。
耐药机制：生物膜及外膜障碍、胞外灭活或钝化酶、主动外排系统将抗生素泵出胞外、抗菌药物作用靶位改变、整合子（1类，3类）
（三）微生物学检验
1、标本采集：按疾病和检查目的，分别采 取不同的标本：患者的血液、脑脊液、胸(腹)水、脓液、分泌液、痰、尿液、十二指肠引流液、粪便等；医院病区或手术室的空气、水、地面、把手、医疗诊断器械及生活用品。
2、标本镜检为革兰阴性，有动力的杆菌
3、分离培养：普通培养基经18—24h形成圆形、扁平隆起、光滑湿润菌落。大多数产生绿脓素或荧光素。少数可产生其他颜色色素，如红脓素（红色）刘婉君，黑脓素（棕色到黑色），青脓素（黄色）。 McC经18—24h形成微小无光泽半透明菌落， 48h菌落中心呈棕绿色
4、生化鉴定：氧化酶阳性，氧化分解葡萄糖、木糖产酸不产气，液化明胶，还原硝酸盐产生氮气，吲哚阴性，利用枸橼酸盐，精氨酸双水解酶阳性。
5、结果分析与报告：结合临床感染症状进行分析
患者血、尿液及无菌体液中分离到铜绿假单胞菌，特别是反复检出即可确定是感染病原菌。如无感染的临床表现，应作为正常菌群。
（四）感染的控制
易感危重病人不应安排在已有过铜绿假单胞菌感染的病房；各种抗菌药物、溶液、软膏、器械等应避免被铜绿假单胞菌污染；采取适当的分型方法对感染菌株进行流行病学调查和监控。
二、荧光假单胞菌
产青脓素，但不能产绿脓素， 4℃生长，42℃ 不生长，最适温度25-30℃ 。
见于水和土壤中，都可作为咽部的正常菌群存在，是人类少见的条件致病菌
荧光假单胞菌和污染的血制品关系密切，可见于近期接受过血液制品而致菌血症的患者。
第二节 rRNAⅡ群 / 伯克菌属
一、嗜麦芽窄食单胞菌
是临床实验室中第三位最常见的非发酵菌，下列特征可用来推测性鉴定：在血平板或麦康凯平板上生长良好、氧化酶阴性、O/麦芽糖产酸，但O/葡萄糖可阴性、赖氨酸脱羧酶阳性、一些菌株产黄色色素
抗生素敏感方式：对大多数抗生素耐药，包括氨基糖苷类和碳青霉烯类，但对TMP/SMZ（复方新诺明）敏感。
（一）生物学性状
1、嗜麦芽窄食单胞菌为有动力杆菌，具有丛极鞭毛，血平板上菌落粗糙呈淡黄色或浅绿色，有氨气味。
2、根据 赖氨酸脱羧酶试验阳性和DNA酶阳性、氧化酶阴性可很容易与其他假单胞菌区别，本菌葡萄糖氧化缓慢，可快速氧化分解麦芽糖。
3、本菌的一个重要特征是对氨基糖苷类抗生素、碳青霉烯类天然耐药，但TMP/SMZ天然敏感。
（二）致病性
引起本菌定植和感染的危险因素有：机械通气、广谱抗生素的预防性应用、化疗、插管和中性粒细胞减少等。
嗜麦芽窄食单胞菌分布广泛，可引起条件感染是一种重要的医院获得性病原体，本菌可分离于几乎所有部位，最常见的是呼吸道。本菌可致多种疾病，包括肺炎、菌血症、心内膜炎、胆管炎、脑膜炎、尿道感染和严重的伤口感染等。
第三节 不动杆菌属
1、鉴定要点：
革兰阴性球杆菌。无动力
氧化酶－，硝酸盐还原－，KIA：底层斜面不变色
注意：与形态相似的奈瑟菌鉴别；与不分解糖的产碱杆菌鉴别
2、致病性：
不动杆菌所致疾病包括肺炎、心内膜炎、脑膜炎、皮肤和伤口感染、腹膜炎和尿道感染等。
不动杆菌对青霉素、氨苄青霉素和头孢他啶均耐药，大多数菌株对氯霉素耐药，对氨基糖苷类抗生素耐药的菌株也逐渐增多，不同菌株对二代和三代头孢菌素耐药性不同，所以每个分离菌株都应进行药敏试验。多重耐药菌株最常多见于鲍曼不动杆菌和溶血不动杆菌。
一、鲍曼不动杆菌
（一）临床意义
广泛分布于自然和医院环境中，能在潮湿和干燥的表面生存，也可存在于健康人的皮肤，在非发酵菌中，本菌是在临床标本中的分离阳性率仅次于铜绿假单胞菌，居第二位的条件致病菌，通常不动杆菌对健康人体不致病，但对体弱者可引起感染。
本菌能够获得多重耐药性和能够在大多数环境表面生存，所以由本菌引起的医院获得性感染有增加的趋势，医院获得性感染最常见的是呼吸道或手术部位、应用器械或ICU的住院患者。
（二）生物学性状
1、形态与染色：常似双球菌，有时不易脱色，易误认阳性菌
2、培养特性与生化反应：
严格需氧、OF试验为产碱型、无动力、氧化酶阴性、硝酸盐还原阴性、枸橼酸盐阳性的革兰染色阴性球杆菌。
血平板培养24小时后，菌落大小0.5-2mm，半透明到不透明，凸起，边缘整齐，无色素形成；大多数菌株麦康凯平板上生长良好，呈无色或淡粉红色。
第四节 军团菌属
军团菌广泛存在于土壤及自然和人工的水环境中，尤其是在空调冷凝水中的检出率最高，其次是土壤、河水、冷却塔、医院淋浴喷头等，是医院感染的重要病原菌之一。大多数病例（85%）是嗜肺军团菌引起。
临床表现多种多样，高发于夏秋季，易侵犯患有慢性器质性疾病或免疫功能低下者，最常见的是肺炎型。
致病物质：微荚膜、菌毛、毒素、多种酶
临床类型：流感样型（轻症型）、肺炎型（重症型）、肺外感染（庞堤阿克热)
免疫性：嗜肺军团菌为胞内寄生菌，细胞免疫在抗感染中起主要作用
临床治疗药物首选红霉素，可加用利福平，而氨基糖甙类抗生素、青霉素、头孢菌素类抗生素对本菌无效。
（一）生物学性状
1、形态：革兰阴性杆菌，常规染色不易着色，用Dieterle镀银法染成黑褐色，Giemsa法染色染成红色，因培养条件不同有明显多形性，有长鞭毛，无芽孢，有微荚膜
2、培养：需氧菌，首次分离需5%CO2，营养要求严格，一般营养琼脂和血琼脂上不生长，须含有半胱氨酸和铁离子，在缓冲活性炭酵母琼脂培养基（BCYE）上3-5天可形成湿润、有光泽灰白色菌落，初期外观呈刻花玻璃样花纹，继续培养消失。
3、生化反应：在含糖培养基上不生长，氧化酶弱阳性，触酶阳性，β内酰胺酶阳性
4、抵抗力：生存能力较强，在蒸馏水中存活100天以上，在污水中可存活1年，对热和常用化学消毒剂敏感。
（二）微生物学检查
1、标本：痰、血液、胸水、气管分泌物等。处理：加温或酸处理
2、分离培养： BCYE琼脂3～5天形成光滑型小菌落，血琼脂、巧合力琼脂和BCYE琼脂，24小时内生长不是军团菌
3、鉴定：色素，氧化酶，触酶和β内酰胺酶试验
荧光抗体染色镜检
血清学试验：检测病人血清中抗军团菌lgM及lgG抗体做出特异性诊断。
分子生物学试验

棒状杆菌属
革兰阳性，一端或两端膨大呈棒状，无荚膜、无鞭毛，不产生芽胞；多为条件致病菌，致病菌为白喉棒状杆菌
一、白喉棒状杆菌
（一）生物学性状
1、形态与染色：G+，菌体细长微弯，一端或两端膨大、有异染颗粒，常排列呈V、L形
2、培养特性：需氧或兼性厌氧，营养要求较高。BAP：有狭窄溶血环。亚蹄酸钾血琼脂平板：分3型，黑色菌落。吕氏血清斜面：灰白色、不透明、有光泽的S型菌落，异染颗粒明显。
3、生化反应：氧化酶＋、葡萄糖＋、麦芽糖＋、硝酸盐还原＋
4、分型：亚蹄酸钾血琼脂平板划分菌落形态为重型、中间型和轻型，据K抗原划分血清型：重型：13个血清型 /中间型：4个血清型 /轻型：40个血清型
5、抵抗力：对湿热抵抗力弱，抗寒冷和干燥，对青霉素、氯霉素、红霉素敏感
（二）致病性
1、白喉外毒素：β棒状杆菌噬菌体带有编码外毒素的tox基因，在溶原阶段基因整合到染色体上即可产生
包括A亚单位和B亚单位：B亚单位有结合和转位功能。A亚单位上有1个催化区。
作用靶点：心肌和神经细胞
A亚单位可使细胞延伸因子-2（EF-2）灭活，影响蛋白质的合成。
作用特点：毒性作用大，1分子能杀一个细胞；多种细胞，特别心肌、神经细胞均有毒素受体；肿瘤细胞对此毒素特别敏感，用于靶向治疗
2、所致疾病：急性呼吸道传染病——白喉
传染源：患者及带菌者。传播途径：飞沫或污染
临床表现：细菌在上呼吸道粘膜生长繁殖，产生毒素,
①细菌与毒素共同作用引起局部症状：炎症，坏死，纤维蛋白渗出你太猖狂。形成假膜导致窒息
②毒素入血引起全身中毒症状
外周神经炎：膈肌麻痹--呼吸困难 /声带麻痹--声音嘶哑 /软颌麻痹--吞咽困难 /心肌---心肌炎
感染后机体可获得牢固的免疫力
（三）微生物学检查
1、标本：咽拭子
2、直接涂片镜检：形态，异染颗粒，
3、分离培养：BAP、吕氏血清斜面，亚碲酸钾平板
4、毒力鉴定：动物试验，Elek平板毒力实验
锡克试验：测定对白喉的免疫力皮肤试验
原理：毒素抗毒素中和反应
方法：注射毒素（毒性、蛋白质）→ 试验，加热破坏的毒素（无毒、蛋白质）→ 对照
结果：48小时观察结果，
有红肿 →阳性反应 →无免疫力
无红肿 →阴性反应 →有免疫力
应用：检查机体对白喉的免疫力、预防接种前的筛选与接种后效果观察、流行病学调查
（四）防治原则
预防：人工主动免疫：注射白喉类毒素（白百破三联疫苗）/人工被动免疫：注射白喉抗毒素 /药物预防：如注射青霉素或口服红霉素
治疗：白喉抗毒素——皮肤试验、早期使用。抗生素

需氧革兰阳性杆菌
一、炭疽芽胞杆菌
（一）临床意义
引起人、蓄共患的急性传染病，包括皮肤炭疽、肺炭疽、肠炭疽、败血性炭疽，为烈性传染病，死亡率极高。
致病因子：
荚膜：抗吞噬，有利于细菌在组织内繁殖扩散
炭疽毒素：保护性抗原、致死因子、水肿因子
病后可获得持久免疫力
（二）生物学性状
1、形态与染色：革兰阳性大杆菌，两端截平，竹节状排列，有芽胞、无鞭毛、可有毒株有荚膜，
芽胞椭圆形，小于菌体，位于菌体中央，多在有氧条件下形成，25～30℃，在培养基中、土壤内、动物尸体解剖后暴露在空气中，都易形成芽胞在活体或完整未解剖尸体内不形成芽胞，尸体严禁解剖！
2、培养特性
普琼平板：灰色、粗糙型菌落；卷发状边缘（低倍镜下）
BAP：不溶血。NaHCO3 BAP：有毒株产生荚膜呈黏液型菌落，挑取时呈粘丝状(鉴别要点)。无毒株则形成粗糙型菌落
肉汤培养基：絮状沉淀生长
明胶：37℃18～24h表面液化成漏斗状，由于细菌沿穿刺线向四周扩散形成倒松树状。
3、生化反应：葡萄糖+ 、麦芽糖+ 、蔗糖+、卵磷脂酶弱+、触酶+、硝酸盐还原试验+、VP＋、吲哚－、硫化氢－、柠檬酸盐－、尿素－、明胶液化＋
胨化牛乳：在牛乳中生长2～4天后牛乳凝固并缓慢胨化
4、抗原
①菌体多糖抗原：与毒力无关，耐热，特异性不高，病兽脏器皮毛加热后仍可与相应抗体反应，称Ascoli热沉淀反应
②荚膜多肽抗原：抗吞噬，与毒力有关
③芽胞抗原：炭疽毒素(Anthrax toxin)： 由保护性抗原、致死因子、水肿因子形成。
5、抵抗力：耐热、耐干燥；对氧化剂敏感；对青霉素、磺胺类抗生素敏感
（三）微生物学检查
1、标本的采集：分泌物、痰、血液、粪便、呕吐物、脑脊液等，严禁宰杀解剖死畜。
2、标本的处理：液体标本取沉渣分离培养；固体标本用生理盐水浸泡，水浴杀死非芽胞菌；血液、脏器、渗出液增菌或直接分离培养。
3、涂片染色：革兰阳性大杆菌、竹节状排列、有明显荚膜和芽胞—初步报告。荚膜荧光抗体染色或荚膜肿胀试验
4、核酸检测：核酸杂交
5、分离培养：BAP或戊烷脒多粘菌素B等选择性培养基。 2%兔血清肉汤增菌→分离培养
6、鉴定试验：
①串珠试验：接种于含青霉素(0.05～0.5U/ml)的肉汤中，37℃培养6h，形成大而均匀成串的圆球状菌体，与青霉素抑制细菌细胞壁合成有关，类炭疽无此现象。
②青霉素抑制试验：接种于含青霉素5、10、100U/ml琼脂平板，37℃培养24h。后两者不生长，前者生长。
③串珠和青霉素抑制联合试验
7、其他试验
①噬菌体裂解试验：AP631炭疽噬菌体
②NaHCO3毒力试验：接种于含0.5%NaHCO3和10%马血清的平板，10%CO2、37℃、24～48h，有毒株形成荚膜 — 黏液型菌落，无毒株不形成荚膜 — 粗糙型菌落
③毒素动物试验：小鼠、家兔或豚鼠皮下接种
④植物凝集素试验：荧光或酶标记PHA与菌体多糖反应
⑤Ascoli 热沉淀试验：可作追溯性诊断
二、蜡样芽胞杆菌
（一）临床意义
1、食物中毒：含菌量达10^5/g以上，夏、秋季多见，中毒食物大多无腐败、变质现象，感官性状正常，应引起注意
呕吐型——耐热肠毒素 /腹泻型——不耐热肠毒素
2、全眼球炎（外伤后）
3、心内膜炎、败血症和脑膜炎
（二）生物学性状
1、形态：革兰阳性大杆菌、两端钝圆、有芽胞、周鞭毛、无荚膜
2、培养特性：需氧或兼性厌氧，最适温度30~35℃，营养要求不高。
普通琼脂平板：菌落较大，灰白色，表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状，有蜡样光泽。BAP 有β溶血。
卵黄平板：生长迅速，培养3h后，虽看不到菌落，但该菌可分解卵磷脂而形成白色的混浊环，称乳光反应或卵黄反应。
3、生化反应：葡萄糖＋、蔗糖＋、麦芽糖＋、卵磷脂酶+ 、VP＋、胨化牛乳＋、液化明胶＋，多次传代后生化特性常可改变
4、分析结果解释：
因食品暴露于空气中，在一定程度都会受到本菌污染，所以不能分离出该菌就认为是引起食物中毒的病原菌。
从食物中分离出菌数≥10^5CFU/g，提示本菌活跃生长，构成潜在危险
从可疑食物分离到的菌株与从病人粪便和(或)呕吐物中分离到的菌株属同一血清型
三、枯草芽孢杆菌
（一）生物学性状
1、形态与染色：革兰阳性大杆菌、两端钝圆，有芽胞、无荚膜、有鞭毛
2、培养特性：BM→灰白色、不透明、干燥、锯齿状粗糙大菌落 /BAP→β溶血大菌落
3、生化反应：触酶+、葡萄糖＋、甘露醇＋、木糖＋、阿拉伯糖－、串珠试验－、卵磷脂酶－